免疫印迹(immunblotting)又称蛋白质印迹(western blot),他是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。western blot是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹(western blot)具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性,现在已成为蛋白分选的一种常规技术。免疫印迹(western blot)常用于鉴定某种蛋白,并能对蛋白进行定性和半定量分选。
与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。
western blot一般步骤:蛋白质抽提,蛋白质定量,变性聚丙稀酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE),蛋白质转移,western blot膜的封闭和抗体孵育,western blot结果检测,western blot数据分析,提供实验报告。
western blot服务内容:专业的队伍,提供完整的实验步骤和结果,提供专业的数据分析,提供电子版扫膜结果,以及灰度值分析。
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